TÉCNICA DE PCR (REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA) PARA LA DETECCIÓN DE CANDIDIASIS HUMANA

TEMA: Nueva reacción en cadena de la polimerasa múltiple para el diagnóstico específico de especies implicadas en la candidiasis humana. 

OBJETIVO: Diseñar y optimizar una técnica de reacción en cadena de la polimerasa múltiple (PCR) considerando parámetros termodinámicos para la detección simultánea de cinco especies de Candida relevantes en la etiología de la candidiasis humana.

MUESTRAS: muestras sanguíneas de pacientes con hemocultivos positivos para Candida spp.

TIPO DE ÁCIDO NUCLÉICO: ADN genómico

EXTRACCIÓN(LISIS, SEPARACIÓN Y PURIFICACIÓN): estuche comercial QIAamp ADN Mini Kit (Qiagen).

GENES A ANALIZAR: se utilizaron la región transcrita interna 2 (ITS2) (AJ249486.1) para C.albicans y la topoisomerasa II (TOPII) para C. parasilopsis(AB049144 .1), C. krusei (AB049139.1), C. tropicalis (ABA049141.1) y C. guillermondii (AB049145.1).

TAMAÑO EN PAR DE BASES: C. albicana(206pb), C. guillermondii(244pb), C.tropicalis(474pb), C.parasilopsis(558pb) y C. krusei(419pb).

 

TIPO DE PCR: PCR múltiple, 30 ciclos.

PASOS:

DESNATURALIZACIÓN: 94 °C durante un minuto.

ALINEAMINETO O UNIÓN DE CEBADORES:53 °C durante 50 segundos.  

EXTENSIÓN: 72 °C durante 80 segundos.

ELECTROFORESIS O VISUALIZACIÓN:

Figura 1: Electroforesis en gel de agarosa al 1.3% de los productos de la PCR múltiple para la identificación de Candida ssp.Marcador de peso Gene Ruler 1kb DNA Ladder (Invitrogen) .

BIBLIOGRAFÍA:

1.

García LT, Luna LJ, Velasco TK, Guerra BE. Nueva reacción en cadena de la polimerasa múltiple para el diagnóstico específico de especies implicadas en la candidiasis humana. Biomédica [Internet]. [consultado el 17 de diciembre de 2023];37(2):200–8. Disponible en: https://www.redalyc.org/journal/843/84350981010/html/

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